钙泊三醇对人角质形成细胞S100A8表达的影响

【摘要】一.研究背景及目的银屑病是一类常见的慢性炎症性皮肤病,皮肤角质形成细胞的异常增殖和分化是银屑病发病的重要环节。人体皮肤是维生素D的合成场所,维生素D及其类似物钙泊三醇也可以作用于角质形成细胞,调节细胞增殖、分化和凋亡。同时在角质形成细胞内,抗菌肽S100A7、S100A8、S100A9可以与IL-17、IL-1、TNF-α等炎症因子相互促进,引起细胞异常增殖与分化,导致银屑病发病；已有研究证实维生素D可以通过拮抗S100A7表达减轻皮肤炎症反应,从而治疗银屑病。基于此,维生素D及其类似物是否可能通过影响角质形成细胞S100A8的表达而参与银屑病的病理生理过程?本课题以体外培养的永生化人角质形成细胞HaCaT细胞系为对象,通过实时定量PCR的方法研究钙泊三醇对细胞内S100A8蛋白表达的影响。二.研究方法(1)HaCaT细胞培养：使用含10%FBS及抗生素的MEM-EBSS培养基常规体外培养HaCaT细胞并传代。(2)TNF-α与钙泊三醇对HaCaT细胞的干预：最后一次传代后细胞融合达80-90%时分为四组,空白对照组不加入任何药物干预,TNF-α组加入100ng/mlTNF-α,钙泊三醇组加入10弓M～10-9M浓度梯度的钙泊三醇,钙泊三醇+TNF-α组在100ng/mlTNF-α的基础上再加入10-5M～10-9M钙泊三醇,上述细胞共同孵育24h。(3)HaCaT细胞内S100A8表达水平检测：细胞成分提取总RNA,反转录为cDNA,采用RT-PCR方法扩增目的基因S100A8及内参β-actin片段并行1%琼脂糖凝胶电泳；使用同样的cDNA及引物通过实时定量PCR的方法扩目的基因S100A8及内参β-actin片段,用2“△C‘法计算各样本S100A8相对表达量,并用单因素方差分析的统计学方法比较各组间S100A8表达的差异。三.研究结果(1)S100A8扩增产物为长度250bp左右的单一片段,β-actin扩增产物为长度130bp左右的单一片段；(2)100ng/mlTNF-α处理体外培养的HaCaT细胞24h后,S100A8表达较空白对照上调19.62倍(P<0.01)；(3)10-7M、10-8M钙泊三醇处理细胞24h后,S100A8表达分别较空白对照上调5.029、2.848倍(P<0.01)；(4)10-5M、10-6M及10-9M钙泊三醇处理细胞24h后,S100A8表达较空白对照无明显变化(P>0.05)；(5)10-5M钙泊三醇与100ng/mlTNF-α共同处理体外培养的HaCaT细胞24h后,S100A8表达下调为单独使用TNF-α时的0.5951倍(P<0.05)：(6)10-7M钙泊三醇与100ng/mlTNF-α共同处理细胞24h后,S100A8表达较单独使用TNF-α时上调1.873倍(P<0.01)；(7)10-6M、10-8M及10-9M钙泊三醇与100ng/mlTNF-α共同处理细胞24h后,S100A8表达较单独使用TNF-α无明显变化(P>0.05)。四.结论(1)TNF-α可以诱导体外培养的HaCaT细胞内高度表达S100A8,证实其可以与IL-1、IL-8、IL-17等炎症因子一起,通过刺激角质形成细胞高度表达S100A8,影响角质细胞增殖与分化,加重皮肤炎症反应,导致银屑病发病。(2)钙泊三醇可能通过影响S100A8表达双向调节角质形成细胞的增殖：高浓度(约10-5M)钙泊三醇下调S100A8表达,发挥抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,并且可以打破S100A8与TNF-α等炎症因子的相互作用,减轻皮肤炎症反应,治疗银屑病皮损；低浓度(约10-7～108M)钙泊三醇上调S100A8表达,主要发挥促进细胞增殖的作用。
【作者】吴大维；
【导师】晋红中；
【作者基本信息】北京协和医学院，临床医学，2014，博士
【关键词】银屑病；角质形成细胞；钙泊三醇；S100A8；基因表达；

【参考文献】
[1]高连生,李会南.西藏羊八井光伏发电站双轴跟踪系统的研究[J].电器工业,2014,01:73-77.
[2]张帅帅,荣学文,李贻斌,李彬.崎岖地形环境下四足机器人的静步态规划方法[J].吉林大学学报(工学版).
[3]贾莎莎.B/S模式的企业安全文化诊断系统开发[D].中国地质大学（北京）,安全技术及工程,2013,硕士.
[4]杨军.欧阳修与北宋书法[D].首都师范大学,美术学,2004,硕士.
[5]刘恒洋.基于组件技术的开放式工艺信息系统研究与开发[D].西北工业大学,机械制造及其自动化,2004,硕士.
[6]石硙岩.不同旋转调强方案用于多发脑转移瘤放射治疗的剂量学研究[D].吉林大学,临床医学,2014,硕士.
[7]和萍,文福拴,薛禹胜,王克文,LedwichGERARD.四种电力系统稳定器的性能比较[J].电力系统自动化,2013,03:30-37.
[8]陈圣洁.中国企业营销道德缺失问题研究[D].贵州财经大学,企业管理,2013,硕士.
[9]郭明凯.恩诺沙星和皮质醇对中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）免疫功能及肠道菌群的影响[D].苏州大学,水产养殖,2012,硕士.
[10]黄搏.A公司员工工作满意度实证研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[11]陈丹丹.《经济生活》教学中的金钱观教育研究[D].华中师范大学,学科教学,2014,硕士.
[12]KHALIDShehzad,NAFTELAndrew.基于轨迹系数特征空间表示法的含有异常情况的自动运动学习(英文)[J].自动化学报,2010,05:655-666.
[13]宗丽芳.微电网后台监控系统的设计[D].曲阜师范大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[14]戴景军.电视连续剧《木卡姆往事》音乐研究[D].河北大学,音乐与舞蹈学,2014,硕士.
[15]黄雪菊.科技管理信息多维数据模型的建立与OLAP设计[D].山东大学,2005.
[16]李琪.NURBS曲线插补对数控铣加工质量影响的研究[D].南京农业大学,机械工程,2013,硕士.
[17]张文龙.安徽省基本医疗保险制度整合中的问题与对策研究[D].安徽大学,公共管理,2014,硕士.
[18]林凯,贺振华,熊晓军,曹俊兴,陈静.基于基质矿物模量自适应提取横波速度反演方法[J].石油地球物理勘探,2013,02:262-267+332+159.
[19]陈从华.成都某写字楼项目营销策略研究[D].西南交通大学,工商管理,2012,硕士.
[20]李六.企业信息化建设及测评问题研究[D].上海海事大学,2003.
[21]鲁小琴,束炯,孙娟.城市环境管理信息系统的应用与技术[J].上海环境科学,2003,11:817-821+849.
[22]李晔卓,田耀斌,姚燕安.可折叠双三角锥滚动机构[J].机械工程学报,2014,11:68-79.
[23]冯林,罗芬,宋薇薇,何明瑞.粗糙环境下分布式知识获取方法研究[J].计算机应用,2005,S1:276-277+279.
[24]曹雅彬.柴油车用NH_3-SCR系统中锰基催化剂的研究[D].吉林大学,应用物理,2013,硕士.
[25]林伯香.最小静校正误差浮动基准面方法[J].石油地球物理勘探,2003,06:611-617+708-578.
[26]刘传斌.嘉丰混凝土搅拌站信息管理系统的设计[D].大连理工大学,计算机技术（专业学位）,2012,硕士.
[27]冯锦海,杨连贺,蒋鑫龙.基于多模的室内POI推荐系统设计和实现[J].计算机工程.
[28]张婷.三粒子任意态的量子隐形传态的理论研究[D].新疆师范大学,理论物理,2013,硕士.
[29]李涛.先秦可持续发展思想研究[D].山西财经大学,经济思想史,2013,硕士.
[30]高骞.过滤器性能评价方法及实验研究[D].北京化工大学,流体机械及工程,2013,硕士.
[31]罗钿.公交停靠站区域长度优化研究[D].长安大学,载运工具运用工程,2014,硕士.
[32]李振春,张慧,张华.一阶弹性波方程的变网格高阶有限差分数值模拟[J].石油地球物理勘探,2008,06:711-716+611+742.
[33]金漫彤,朱聪颖,金赞芳.秸秆土聚物保温建筑材料工艺及界面结构分析[J].农业工程学报,2015,04:332-338.
[34]段瑾.美式新古典沙发的形态特征研究[D].中南林业科技大学,设计艺术学,2013,硕士.
[35]杨涛.传统工业企业电子商务研究[D].东华大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[36]刘兴茂.高校信息化建设中的问题及解决办法[J].电子技术与软件工程,2014,11:241.
[37]杜洋洋.刑法中的数额累计问题研究[D].海南大学,刑法学,2014,硕士.
[38]马超.男性性权利刑法保护研究[D].贵州民族大学,刑法学,2012,硕士.
[39]王庆丽.养殖大黄鱼和海水鲈鱼冷藏过程中特定腐败菌的鉴别[D].浙江工商大学,食品工程,2012,硕士.
[40]蔡绍雨.恶性疟原虫标准株的建立[D].大理学院,病原生物学,2013,硕士.
[41]汪立群.大学生职业价值观、职业决策自我效能感与择业焦虑的关系研究[D].内蒙古师范大学,发展与教育心理学,2013,硕士.
[42]邵成成,王锡凡,王秀丽,杜超.考虑风电的电力联营市场日前出清模型[J].电力系统自动化,2014,13:45-50.
[43]梁彦,谭伟,潘泉,张洪才.两级交互式多模型算法[J].自动化学报,2001,05:651-656.
[44]支泽仑.白腐菌预处理麦秆生物制氢的实验研究[D].西北大学,材料化学,2013,硕士.
[45]吕海琛.十七年时期《人民文学》：小说中爱情描写探微[D].吉林大学,中国现当代文学,2004,硕士.
[46]王计敏.蓄热式铝熔炼炉熔炼过程多场耦合的数值模拟及优化研究[D].中南大学,2012.
[47]孙岩.《花间集》女性形象及“双性之美”[D].中南民族大学,中国古代文学,2013,硕士.
[48]陶占良,王洪波,陈军.锂离子电池负极硅基材料[J].化学进展,2011,Z1:318-327.
[49]宋秋婵.论中日钓鱼岛争端的国际司法解决[D].西南政法大学,国际法学,2012,硕士.
[50]曾小红.中美酒店简介体裁对比分析[D].广东外语外贸大学,商务英语研究,2013,硕士.